中美藥典細菌內毒素檢查法指導原則異同
日期：2023-11-21 | 中海生物行業(yè)綜合 | 瀏覽：1403 次
《中華人民共和國藥典》（2020 年版）（簡(jiǎn)稱(chēng)“《中國藥典》”）收載了9251 細菌內毒素檢查法應用指導原則。同年，《美國藥典》（47 版）（簡(jiǎn)稱(chēng)“《美國藥典》”）也收載了1085 細菌內毒素檢查法應用指導原則。表明細菌內毒素檢查法在世界范圍內經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，為了應對新的情況，均需要進(jìn)行新的官方解讀和指導。中、美兩國藥典中的內毒素檢查法指導原則具有多項不同，本文參考《美國藥典》1085 細菌內毒素檢查法應用指導原則和《中國藥典》9251 細菌內毒素檢查法應用指導原則，對中美內毒素標準物質(zhì)管理、質(zhì)量管理的異同，指導原則中易誤讀的要點(diǎn)解讀等相關(guān)內容進(jìn)行概括，為內毒素檢測從業(yè)者提供參考。
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標題內容 |
《美國藥典》主要內容 |
《中國藥典》主要內容 |
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簡(jiǎn)介 |
背景介紹 |
簡(jiǎn)介 |
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背景知識：熱原與內毒素 |
1）“細菌內毒素”或“內毒素”是指革蘭陰性細菌（GNB ）外細胞膜的復雜成分，是具有生物活性的脂多糖（lipopolysaccharide, LPS），包括各種蛋白質(zhì)、磷脂和脂蛋白。 2）內毒素可能會(huì )在GNB 死亡后在細胞壁片段中保持活性，因此供試品可能是無(wú)菌的，但仍可能檢測出內毒素。 3）RSE：參考標準品（Endotoxin Reference Standard, 中國國家標準品）；CSE：對照標準內毒素（Control standard Endotoxin, 中國稱(chēng)為工作標準品）；通過(guò)Westphal 熱酚法從GNB 細胞膜中提取出來(lái)； 4）需要驗證相關(guān)內容：測定限值；最大有效稀釋倍數（MVD。） |
無(wú) |
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預備性試驗 |
1）工作標準品標定：使用RSE對CSE的校準、使用凝膠法確定CSE效價(jià)、使用定量的動(dòng)態(tài)法和終點(diǎn)法確定CSE效價(jià)、液體CSE的活性測定； 2）質(zhì)量管理：試驗人員資質(zhì)、設備和儀器的校準與檢定、實(shí)驗室環(huán)境條件 |
1）無(wú)（我國RSE和CSE由國務(wù)院藥品監督管理部門(mén)依法設立的藥品驗機構生產(chǎn)并組織協(xié)作標定賦值；美國RSE由FDA生產(chǎn)并組織協(xié)作標定給賦值，CSE由鱟試劑生產(chǎn)廠(chǎng)家生產(chǎn)并根據RSE標定CSE。） |
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方法適用性 |
限度的計算：注射用藥品、眼部用產(chǎn)品、復合無(wú)菌制劑、活性底物和賦形劑、藥械組合產(chǎn)品以及醫療器械等 |
只對注射用藥品的限值確定做了相關(guān)要求，但對于多種規格的注射劑以及原料藥制定內毒素限值的制定方面給予了明確指導。（對應1.細菌內毒素限值的確定） |
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MVD：當產(chǎn)品在MVD 顯示陽(yáng)性時(shí)，表明其不符合內毒素限量要求，在這種情況下，可以使用超過(guò)MVD 的稀釋倍數來(lái)進(jìn)行檢驗。并建議實(shí)驗室可通過(guò)稀釋至陰性（凝膠法）或到達標準曲線(xiàn)上的有效讀數（定量法）的方式來(lái)確定產(chǎn)品中細菌內毒素的總含量。 |
在凝膠法檢驗時(shí)，如果計算出的MVD值不是整數，可以使用小于MVD的整數進(jìn)行實(shí)驗。當出現陽(yáng)性結果時(shí)，為判斷產(chǎn)品是否合格，需采用計算的MVD重新測試。（對應5.其他（MVD 部分）） |
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干擾的排除：比較詳細地介紹了一些常見(jiàn)的干擾因素產(chǎn)生的原因和排除的方法。 |
重點(diǎn)介紹了目前細菌內毒素檢測的一些難題，如微球脂質(zhì)體等采用包合技術(shù)制備的特殊樣品，以及難溶性的注射用原料藥和輔料，應采取特殊的前處理將微球和脂質(zhì)體以及難溶性樣品被包裹的內毒素釋放出來(lái)，再進(jìn)行檢測，并且針對不同類(lèi)型的樣品給予了不同的建議（對應3.供試品的前處理方法） |
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日常檢測 |
采樣：對取樣所有材料（勺子，移液管，瓶）的質(zhì)地要求，采用必須采取的預防措施，生產(chǎn)中循環(huán)水系統中如何取樣，粉狀和顆粒狀固體尤其是對于高黏度材料如何取樣和應注意的問(wèn)題等。 |
無(wú) |
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合并：允許合并檢測 |
無(wú) |
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OOS和重新試驗：系統適應性參數未按預期發(fā)揮作用的試驗被稱(chēng)為無(wú)效試驗，真正的OOS結果僅在執行了有效的測定并產(chǎn)生超出規格的結果時(shí)存在。對OOS 調查的內容進(jìn)行了描述。 |
無(wú) |
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標準曲線(xiàn)控制：對光度測定法中的線(xiàn)性要求是| r |≥0.980。并要求用三個(gè)有效數字表示，最后一個(gè)“0”很重要；在一個(gè)控制良好的實(shí)驗室中，相關(guān)系數通常大于0.980。所有標準曲線(xiàn)都有一個(gè)對應的線(xiàn)性方程y = mx+b，其中m是標準曲線(xiàn)回歸線(xiàn)的斜率，b是y軸截距。 |
無(wú)操作細節，但是要求方面與《美國藥典》一致。 |
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替代方法 |
法定方法：凝膠限度法、凝膠半定量法、動(dòng)態(tài)顯色法、終點(diǎn)顯色法、動(dòng)態(tài)濁度法、終點(diǎn)濁度法； 替代方法的要求：必須充分驗證用于檢測細菌內毒素的替代方法，以確保使用的替代方法等同于或優(yōu)于現有的內毒素檢查法，并最終由相應的監管機構批準； |
與《美國藥典》一致（對應2.方法的選擇及5.其他（替代方法部分）） |
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詞匯表和參考文獻 |
詞匯表和參考文獻 |
無(wú) |
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產(chǎn)品內毒素檢查法的建立 |
無(wú) |
《中國藥典》規定為了驗證樣品和不同廠(chǎng)家鱟試劑反應的一致性：應使用兩個(gè)生產(chǎn)廠(chǎng)家的鱟試劑對至少3 批樣品進(jìn)行干擾試驗。并且明確建議了不宜建立細菌內毒素檢查項的情況：無(wú)法排除供試品對細菌內毒素檢查的干擾作用或只能使用最高靈敏度鱟試劑（凝膠法0.03 EU·mL-1，光度法0.001 EU·mL-1）。（對應4.產(chǎn)品內毒素檢查法的建立） |
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總結 |
《美國藥典》在生產(chǎn)過(guò)程中、實(shí)驗細節、質(zhì)量管理給予了較多指導 |
《中國藥典》在方法的選擇、供試品的前處理方法、產(chǎn)品細菌內毒素檢查法建立給予了較多指導 |
參考文獻：
[1]裴宇盛,陳晨,蔡彤,趙小燕,高華.中、美藥典細菌內毒素檢查法應用指導原則的比較和解讀[J/OL].中國藥物警戒:1-8[2022-11-03].DOI:10.19803/j.1672-8629.20211190.
[2] Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China Vol IV(中華人民共和國藥典,四部)[S]. Beijing: China Medical Science Press, 2020: 19.
[3]The United States Pharmacopeial Convention. U.S.Pharmacopeia 43/ National Formulary 38[M]. Baltimore: United Book Press, 2020.
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